我們應(yīng)用三氯化鋁對戊二醛(GA)處理的牛心包瓣進(jìn)行改良處理，探討處理后熱收縮溫度、力學(xué)特性及在大鼠皮下鈣化情況，結(jié)果報道如下。

材料與方法

1．牛心包獲取及分組處理：取3～4歲小牛新鮮心包，4℃生理鹽水沖洗后剔除表面結(jié)締組織。4小時內(nèi)行以下分組處理．①GA組；新鮮心包浸入4℃o．6%GA(pH7.4)內(nèi)，24小時后移入4℃0.2%GA(pH7.4)中，3周后待實驗．②AICl3改良組：GA處理后心包片經(jīng)0.9%生理鹽水漂洗3×10分鐘后浸入O.lMAICl3(pH3．O)溶液中(25—30℃)48小時后實驗待用。③PBS組；新鮮心包浸入4℃磷酸緩沖液(PBS)，(pH7.4)內(nèi)，實驗待用。

2．熱收縮溫度測定：SW-1型收縮溫度測定儀測定各組心包熱收縮溫度。

3．力學(xué)分析：按Lee方法行力學(xué)分析，(Ml00型電子千能試驗機(jī)，日本)測量。①10、20、60、100秒應(yīng)力保留值(Stessremaining'SR=Q(t)/Q(t=0)×100%，Q(t=O)為負(fù)荷600g時初始應(yīng)力值，Q(t)為各時間段應(yīng)力值）。②斷裂極限拉應(yīng)力(Ultimatetensilestrength，UTS)和斷裂應(yīng)變(Strainatfracture，SF-(△L/Lo)×100%，La為心包片初始長度，△L一斷裂時長度-Lo)。

4．大鼠皮下埋植鈣化實驗：取剛斷奶Wistar大白鼠(4—5周齡，50—70g，雌雄不限)，隨機(jī)以時間段分組（埋植后7、21、60、90天）編號，按Levy方法行大鼠背部皮下埋植。普食飼養(yǎng)7、、21、60、90天處死大鼠行以下檢測；①鈣鋁定量：各時間段心包片取出后，日立180-80Zeem原子吸收光譜測定各組鈣含量及三氯化鋁改良處理前后各時間段心包Al3+含量。②組織學(xué)觀察；取各組埋植前后備時間段心包各一塊行HE及Van-kossa染色，光鏡觀察。取埋植前及埋植后90天心包片行透射電鏡觀察。

5．統(tǒng)計方法：各組數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)誤表示，以漢化SAS統(tǒng)計軟件包行F及q檢驗．P<0.05為差異顯著，P

1．熱收縮溫度測定：AICl3改良處理心包的熱收縮溫度較GA處理組心包收縮溫度高，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，與PBS組比較，兩處理組熱收縮溫度均有極顯著提高(P<0.01)。

2．力學(xué)分析結(jié)果：見表1，三氯化鋁改良組與GA組各時間段應(yīng)力保留值以及極限拉應(yīng)力與斷裂應(yīng)變均顯著高于PBS組(P<0.01)，三氯化鋁改良組與GA組心包片各力學(xué)指標(biāo)均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。

3．鈣化結(jié)果：(1)鈣含量測定：如表2，常規(guī)GA處理組牛心包在大鼠皮下鈣含量進(jìn)行性增加，三氯化鋁改良處理則極顯著抑制這種鈣化發(fā)生。自皮下埋植第21天起，三氯化鋁改良組心包鈣含量極顯著低于GA組(P<0.01)。(2)埋植前各組心包在光鏡HE、Von-kossa染色下無明顯差異，埋植90天HE、Von-kossa染色揭示GA組心包發(fā)生廣泛鈣化，透射電鏡揭示GA組心包膠原本身，膠原間質(zhì)及心包表面均發(fā)生鈣化，其形態(tài)呈片狀、針狀，與膠原纖維走型一致，PBS組，三氯化鋁改良組未發(fā)生鈣化。

4．三氯化鋁改良組心包三氯化鋁處理前后鋁含量有極顯著差異(P<0.01)，在大鼠皮下90天內(nèi)，AI3+無明顯變化(P>0.05)。

討論

三氯化鋁改良處理生物瓣機(jī)理目前尚不清楚，可能的機(jī)理是
1．Al3+與膠原蛋白羧基鉻合降低負(fù)電性，減少鈣離子結(jié)合。
2．Webb認(rèn)為Al3+競爭抑制Ca2+與磷結(jié)合，從而抑制晶核生長。熱收縮溫度是生物材料交聯(lián)度的一個間接度量，本實驗中Al3+處理可提高生物瓣收縮溫度，但與GA組比較無統(tǒng)計學(xué)差異，與可能因GA與膠原纖維膠聯(lián)密度大，Al3+在膠聯(lián)作用上貢獻(xiàn)不大。

本實驗結(jié)果表明：三氯化鋁改良處理可有效抑制鈣化發(fā)生，且不減低GA處理后牛心包瓣良好的力學(xué)特性，Al3+與牛心包結(jié)合緊密，在大鼠皮下埋植90天內(nèi)未見明顯丟失，可穩(wěn)定地發(fā)揮其抗鈣化作用。