摘 要： 目的探究電針對三氯化鋁致擬阿爾茨海默病(AD)模型小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的保護(hù)作用。方法將40只健康成年小鼠按隨機(jī)數(shù)表法隨機(jī)分為對照組、模型組、針刺組、電針組,每組10只。除對照組外,其余組給予三氯化鋁(60 mg/kg),連續(xù)7d,導(dǎo)致小鼠擬AD模型后,對各組小鼠進(jìn)行避暗試驗(yàn),測定其治療前潛伏期和錯(cuò)誤次數(shù)。針刺組針刺百會和大椎穴,電針組電刺激百會和大椎穴,7 d后再次測定各組小鼠治療后的潛伏期與錯(cuò)誤次數(shù),并取腦測定腦重系數(shù)。通過觀察治療前后各組的潛伏期、錯(cuò)誤次數(shù)和小鼠腦重系數(shù)等指標(biāo)。結(jié)果 治療前模型組、針刺組及電針組潛伏期較對照組顯著縮短(P<0.01);錯(cuò)誤次數(shù)較對照組明顯增加(P<0.05)。治療后潛伏期針刺組、電針組較模型組明顯延長(P<0.05),電針組與針刺組相比,潛伏期有所延長,但差異無顯著性(P>0.05);錯(cuò)誤次數(shù)電針組較模型組顯著減少(P<0.05),電針組與針刺組、針刺組與模型組相比,錯(cuò)誤次數(shù)均有所減少,但無顯著差異。腦重系數(shù)模型組較對照組顯著降低(P<0.01),針刺與電針組與模型組相比,腦重系數(shù)明顯增加(P<0.05),電針組較針刺組腦重系數(shù)有增加趨勢,但兩者比較無顯著差異。結(jié)論 電針與針刺均能對小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙發(fā)揮保護(hù)作用,電針的作用優(yōu)于針刺。

研究發(fā)現(xiàn),鋁可以在腦組織中蓄積,干擾腦組織活動,破壞神經(jīng)元結(jié)構(gòu),從而導(dǎo)致中樞神經(jīng)功能障礙。故很多藥物治療阿爾茨海默病(AD)的研究常以三氯化鋁模擬AD動物模型。鋁可增強(qiáng)腦組織中脂質(zhì)過氧化水平,引發(fā)炎癥反應(yīng),促進(jìn)腦細(xì)胞凋亡,使腦神經(jīng)細(xì)胞受到損傷,進(jìn)而使擬AD模型動物出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶障礙。電針具有針刺和電刺激的雙重治療作用,不但具有針刺的效果,還具有抗炎、抗氧化、改善血液循環(huán)、抑制細(xì)胞凋亡,提高組織對自由基的抵抗能力等作用,從而可能對擬AD動物模型學(xué)習(xí)記憶能力起到保護(hù)作用。本研究觀察電針對于三氯化鋁致AD小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 動物與分組

選用健康成年小鼠40只,體重25~30g,不計(jì)雌雄,由四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供,許可證號:SCXK(川)-10-2006。并將40只小鼠按隨機(jī)數(shù)表法分為四組:對照組、模型組、針刺組、電針組,每組10只。

1.2 試劑和儀器

結(jié)晶氯化鋁:成都科龍化工試劑廠,批號:20040602;氯化鈉注射液:安徽雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司,批號:1101202E。華佗牌SDZ-Ⅳ型電針治療儀:蘇州醫(yī)療用品廠有限公司;BA-200自動避暗測試儀:成都泰盟科技有限公司;華佗牌無菌針灸針:蘇州醫(yī)療用品廠有限公司;上皿電子天平:上海精科電子天平儀器廠。

1.3 模型的制備及治療措施

將四組小鼠按隨機(jī)數(shù)表編號后分籠飼養(yǎng),模型組、針刺組、電針組按60mg/kg的量給予三氯化鋁皮下注射,對照組等體積給予生理鹽水皮下注射,1次/d,連續(xù)7d。造模完成后,將四組小鼠同時(shí)固定于小鼠板上,對照組和模型組不給予治療措施,針刺組和電針組小鼠取“百會”(小鼠頭部正中兩耳間,平刺2mm)、“大椎”(第7頸椎棘突下,向下直刺4mm)二穴,針刺組刺入后留針15min拔出;電針組刺入后給予疏密波治療,百會接正極,大椎接負(fù)極,持續(xù)時(shí)間15min,頻率4/20 Hz,電流0.5~1mA,以背部肌肉出現(xiàn)輕微抽動及尾巴擺動為度,連續(xù)電針7d,每天固定時(shí)間電針1次。電針完畢后將各組小鼠同時(shí)從小鼠板上取下,放入清潔籠具中飼養(yǎng),治療期間各組小鼠自由進(jìn)食、飲水,每天更換墊料,并保證飼養(yǎng)環(huán)境適宜的溫度、濕度,適當(dāng)通風(fēng),避免飼養(yǎng)不當(dāng)而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動物死亡。

1.4 指標(biāo)檢測

1.4.1 避暗測試

采用BA-200自動避暗測試儀測試,反射箱分大小相等的6個(gè)箱,造模結(jié)束后,將四組小鼠在反射箱中先訓(xùn)練3min,間隔24h后對各組小鼠進(jìn)行治療前避暗測試;治療完畢后,采用同樣的方法對各組小鼠進(jìn)行治療后避暗測試。具體方法為在反射箱通電的情況下,將小鼠放入明室,記錄小鼠第一次從明室進(jìn)入暗室的時(shí)間,稱為潛伏期(LT);小鼠受電擊后逃避性地跑出暗室,其次數(shù)稱為錯(cuò)誤次數(shù)(EN),觀察并記錄潛伏期及5min內(nèi)小鼠的錯(cuò)誤次數(shù)。

1.4.2 腦重系數(shù)測定

治療后避暗試驗(yàn)測試完畢,稱量并記錄小鼠體重,然后將小鼠斷頭處死,迅速取下腦橋基底部上緣水平以上的全部腦組織,除去多余組織后,立即用生理鹽水沖洗血液及黏附組織,再用濾紙拭去多余的水分,立即稱量并記錄腦濕重,按以下公式計(jì)算腦重系數(shù):腦重系數(shù)=腦濕重(g)/體重(g)×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0軟件進(jìn)行SNK法(q檢驗(yàn))。

2 結(jié)果

2.1 小鼠基本狀況

造模后各組小鼠自由進(jìn)食、飲水,模型組小鼠多表現(xiàn)為動作不靈活,身體蜷縮,被毛光澤度降低,并可見豎毛,且進(jìn)食較正常小鼠減少。對照組精神狀態(tài)良好,進(jìn)食、飲水正常,動作靈活,反應(yīng)靈敏,少有蜷縮。電針組和針刺治療后,電針組和針刺組小鼠精神狀況較模型組有較明顯的改善,被毛光澤度提高,蜷縮者較模型組明顯減少。在電針和針刺過程中,可能由于人為操作不當(dāng)和個(gè)別小鼠對針刺和電針不可耐受等原因,導(dǎo)致電針組小鼠死亡1只,針刺組小鼠死亡2只,其余組無小鼠死亡,總死亡率為7.5%。之后及時(shí)補(bǔ)充同批次實(shí)驗(yàn)動物,使每組實(shí)驗(yàn)動物在數(shù)量上保持一致。

2.2 小鼠避暗試驗(yàn)結(jié)果

治療前模型組、針刺組及電針組LT較對照組顯著縮短(P<0.01);模型組、針刺組及電針組組EN較對照組明顯增加(P<0.05),針刺與電針組間無顯著差異(P>0.05)。表明Al Cl3致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型復(fù)制成功,見表1。治療后針刺組與電針組LT相比于模型組明顯延長(P<0.05),電針組與針刺組相比,治療后LT有所延長,但兩者比較無顯著差異(P>0.05);治療后電針組EN較針刺組顯著減少(P<0.05),電針組與模型組、電針組與針刺組相比,EN均有所減少,但兩兩間比較無顯著差異,說明電針組對于Al Cl3致學(xué)習(xí)記憶障礙的保護(hù)作用明顯優(yōu)于針刺組。見表1。

2.3 小鼠腦重系數(shù)測試結(jié)果

與模型組(0.014 3±0.0009)比較,對照組、針刺組及電針組腦重系數(shù)顯著增高(0.017 6±0.001 3,0.016 3±0.002 4,0.016 8±0.000 9,P<0.05),其余各組間比較無顯著差異(P>0.05)。電針組相對于針刺組腦重系數(shù)有所增加,但兩者比較無顯著差異(P>0.05)。

表1 各組小鼠治療前后避暗試驗(yàn)LT及EN比較(±s,n=10)

3 討論

研究證實(shí),鋁加強(qiáng)腦組織中的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)是鋁產(chǎn)生慢性神經(jīng)毒性作用的主要機(jī)制之一,鋁可以引起腦組織中自由基的大量產(chǎn)生,從而引發(fā)炎癥反應(yīng)而致神經(jīng)元喪失和認(rèn)知功能障礙。而且,研究發(fā)現(xiàn),在AD患者腦組織中,氧化性損傷廣泛存在,慢性鋁接觸可誘導(dǎo)、甚至加重AD的氧化性損害。有研究顯示,鋁可直接損傷記憶的生理基礎(chǔ)———突觸可塑性,從而導(dǎo)致動物出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶功能障礙。劉永琦等研究發(fā)現(xiàn),老年癡呆病人腦重系數(shù)較正常人減少,大腦萎縮,腦體積縮小。而鋁在血液中主要與轉(zhuǎn)鐵蛋白、白蛋白和IgG結(jié)合形成復(fù)合,沉淀于血液和血管壁,造成免疫異常、血管和血腦屏障損害,使AD患者腦血流供應(yīng)量減少。雖然有較多關(guān)于AD機(jī)制的研究,但是,至今AD的具體發(fā)病機(jī)制仍不太清楚。

電針具有抗氧化、抵抗自由基、改善血液循環(huán)、降低Ca含量、保護(hù)損傷神經(jīng)、保護(hù)損傷腦組織和抑制細(xì)胞凋亡等作用;而且電針同時(shí)具有針刺的功效,中醫(yī)認(rèn)為,AD病位在腦,辨證以腎精不足,髓海空虛為本,痰瘀蒙蔽清竅為標(biāo),強(qiáng)調(diào)補(bǔ)腎活血以治其本,醒神開竅以治其標(biāo)。研究證實(shí),針刺治療AD確有補(bǔ)腎活血、醒神開竅的作用,標(biāo)本同治,盡早緩解AD癥狀,有助于提高AD患者生存質(zhì)量。據(jù)《靈柩·海論》記載,百會穴為督脈和足太陽膀胱經(jīng)的交會穴,具有醒神開竅之功效,為治療老年性癡呆的主要穴位,經(jīng)臨床研究證實(shí),針刺此穴對于本病可能出現(xiàn)的精神、神志異常均有一定的療效;根據(jù)《素問·氣府》描述,大椎位于第7頸椎棘突下,屬督脈經(jīng)穴位,是手足六陽經(jīng)的交會穴,故稱之為“諸陽之會”,針刺此穴可通調(diào)諸經(jīng),具有增強(qiáng)各臟腑經(jīng)絡(luò)之功效,亦可促使陰陽平衡。

本研究結(jié)果顯示電針對AD小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的保護(hù)作用明顯優(yōu)于針刺,其原因可能與電針能更有效地抵抗自由基,防止脂質(zhì)過氧化作用,抑制腦組織神經(jīng)細(xì)胞凋亡,保護(hù)神經(jīng)元功能,減輕腦萎縮有關(guān),從而對擬AD模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力起到保護(hù)作用。

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作者簡介：楊拯(1980-),男,碩士,副研究員,主要從事老病及學(xué)習(xí)記憶障礙相關(guān)疾病研究。

作者簡介：王政(1992-),男,主要從事老年病及學(xué)習(xí)記憶障礙研究。