淫羊藿為2000年版《中華人民共和國藥典》收載品種，具有補腎陽、強筋骨、祛風濕的功能。淫羊藿總黃酮(TFE)是其主要活性成分，目前常以TFE含量高低作為判斷淫羊藿質(zhì)量優(yōu)劣和提取分離工藝的指標。TFE的含量測定方法采用紫外分光光度法，以淫羊霍苷為對照品，在270nm測定。筆者認為上述測定方法存在一些問題，即樣品是否存在270nm有吸收的非黃酮成分？通過對以上問題的研究，建立了TFE的含量測定方法：樣品經(jīng)提取、三氯化鋁絡合后，采用分光光度法，在413nm處，以淫羊藿苷為對照品測定含量。

1材料與儀器

UV-240IPC型紫外分光光度計（日本島津公司）；淫羊藿苷對照品，中國藥品生物制品檢定所，批號為0737-9910;淫羊藿藥材購自安國民生藥材行，經(jīng)劉珂教授鑒定為淫羊藿EpimediumbrevicornumMaxim。試驗所用其他試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1對照品溶液的制備：精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成0.1mg/mL的溶液，即得。

2.2供試品溶液的制備：取干燥的淫羊藿葉粉末（過40目篩）約0.29，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理1h，再稱定質(zhì)量，用稀乙醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液1mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度。搖勻，作為供試品溶液。

2.3顯色劑對紫外吸收光譜的影響：精密量取淫羊藿苷對照品溶液和供試品溶液各1.0mL置10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，用甲醇作空白液，按分光光度法，在200-500nm范圍內(nèi)進行掃描，記錄紫外吸收光譜，見圖1。精密量取淫羊藿苷對照品和供試品溶液各3.0mL，置10mL量瓶中，加l%三氯化鋁(甲醇)1.0mL，搖勻，室溫放置15min，同法制得空白液，按分光光度法，在200-500nm范圍內(nèi)進行掃描，記錄紫外吸收光譜，見圖2。

 

根據(jù)測定結果可看出，通過顯色后再采用紫外分光光度法，在413nm處測定，可以避開雜質(zhì)的干擾，測定結果更合理。

2.4最大吸收波長及顯色劑用量的確定：精密量取淫羊藿苷對照品溶液3.0mL6份和供試品溶液3.0mL6份，分別置10mL量瓶中，各精密加入l%三氯化鋁（甲醇）0.2,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0mL，分別用甲醇稀釋至刻度，搖勻，室溫放置15min。同法制得6份空白。按分光光度法，在200-500nm波長范圍內(nèi)進行掃描。結果表明：1）1%三氯化鋁(甲醇)的用量在0.2-4.0mL范圍內(nèi)不影響測定結果；2）在413nm處未經(jīng)最色時幾乎無吸收，顯色后有吸收峰。為更好地避開干擾。故選擇在413nm處測定，顯色劑用量定為l%三氯化鋁（甲醇）1.0mL。

2.5顯色穩(wěn)定性考察：淫羊藿苷對照品溶液和供試品溶液顯色后，放置不同時間測定吸光度。結果表明，淫羊藿苷對照品溶液和供試品溶液顯色后15-120min內(nèi)顯色穩(wěn)定，吸光度變化不大。

2.6線性關系考察：精密量取淫羊藿苷對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0mL，分別置10mL量瓶中，精密加入1%三氯化鋁(甲醇)1.0mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置15min。同法制得空白液，按分光光度法，在413nm波長處測定吸光度，以淫羊藿苷對照品濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，進行線性回歸，得回歸方程為：Y=0．0144X-0.0009相關系數(shù)：r=0.9999，結果表明，淫羊藿苷對照品在10.04-80.32μg/mL線性關系良好。

2.7精密度考察：取供試品溶液30mL，置于10mL量瓶中，對同一供試品溶液連續(xù)測定5次，RSD=0.37%，結果表明該方法精密度良好。

2.8回收率試驗：取淫羊藿樣品5份，每份約0.2g，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，分別精密加入淫羊藿苷對照品約15mg，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，取供試品溶液30mL，置于10mL量瓶中，測定含量。計算得平均回收率為99.94c%，RSD=1.42%。

2.9重現(xiàn)性試驗：取同一批淫羊藿樣品5份。分別按供試品溶液制備項下的方法制備供試品溶液，測定含量，結果分別為7.58%，7.43%，7.62%，7.56%和7.66%,RSD=1.74%.

2.10兩種方法測量的結果比較：將2.9中的5份供試品溶液按《中華人民共和國藥典》方法測量，結果分別為10.14%，9.97%，10.03%，10.11%和10.07%，平均值為10.06%。2.9項下測量結果的平均值為7.57%。

3結論

通過比較淫羊藿苷、淫羊藿提取液經(jīng)1%三氯化鋁(甲醇）試液顯色前后的紫外吸收光譜，認為淫羊藿提取液經(jīng)1%三氯化鋁（甲醇）試液顯色后，采用分光光度法，以淫羊藿苷為對照品，在413nm處測定藥材中TFE含量更合理。