三氯化鋁在水體中腸道病毒濃縮中的應用
腸道病毒(Enterovirus,EV)是影響人體健康的重要病原微生物之一,水體中的腸道病毒必須通過有效的濃縮才能提高檢出率。本法依據絮凝原理,采用三氯化鋁和氯化鈉聯合絮凝,有利于水中腸道病毒的濃縮,方法操作簡便,結果滿意。
1材料與方法
1.1絮凝與濃縮
取含Polil病毒水樣1L,加入0.05M三氯化鋁溶液10ml,10g氯化鈉充分混勻后,置入冰箱過夜。次日棄去上清液,沉淀物3000r/min離心20分鐘,離心后濃縮物加入PH11.4的甘氨酸EDTA緩沖液5ml,使絮凝塊溶解。然后調整PH至7.4,并加入抗菌素適量,最終體積約6.5ml。取含甲肝病毒水樣200ml,用上述方法絮凝濃縮,最終體積約1ml。
1.2病毒檢測
Polil病毒檢測,以濃縮物按10倍遞增稀釋,每個稀釋度接種4管BGM細胞,連續(xù)觀察細胞病變7天,以TCD50表示病毒滴度,并計算回收率。甲肝病毒檢測,以濃縮物接種FRhk4細胞,33℃21天,用免疫螢光法檢測存活。
1.3檢測樣品
采用脫氯自來水加入一定量的Polil病毒和天然海水加入一定量的甲肝病毒 作為檢測樣品。
2 結果與討論
含Polil病毒水樣經絮凝濃縮后, 檢測結果的回收率為 83.74%~96.14%, 平均回收率為 92%, 見表 1。
含甲肝病毒水樣經絮凝濃縮后, 在培養(yǎng)一個月期間內, 定期檢查病毒存活情況, 同樣獲得滿意結果。
有報道國外曾采用氯化鋁濃縮自來水Polil 病毒, 回收率為 71%化鋁2氯化鈉絮凝濃縮法, 把回收率提高到92%。由于本法操作簡便, 不需特殊的試劑和設備, 適合于基層實驗室使用。